一、什么是PCR

PCR 是聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）的简称，是一种分子生物学技术，用于放大特定的 DNA 片段，可看作生物体外的特殊 DNA 复制。

二、PCR实验室产生的危害

PCR 实验室研究过程中，很多操作都会产生气溶胶，比如离心、混匀等操作。

三、PCR实验室设计的核心

为保证环境安全，PCR 实验室设计建设需独立区域设计，避免与其余环境的交叉混杂，因此临床基因扩增检验实验室设计的核心问题是如何避免污染。

四、实验室设计建设方案

PCR 实验室是临床基因诊断的工作场所，与普通实验室相比，检测必须在无菌无尘环境下进行操作，对生物安全防护、操作规范、质量控制、管理等各项要求更为严格。PCR 实验室的建设从设计施工、设备配套、试剂耗材、场地验收、人员培训每个阶段都应详细考量。为了最大程度的避免在检测过程中出现污染、假阳性和假阴性等现象，PCR 实验室要按照四个区域分区设计为宜；实验室的布置不仅考虑实用，同时要兼顾疏散，人流物流严格分流；设计合理压力梯度保证气流单向流动防止气溶胶污染。

（一）分区设计

试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。

（二）单向流向

为避免交叉污染，工作人员进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区，严禁逆向进入各区。

（三）实验室空调通风系统设计及压力控制

PCR 实验室并没有严格的净化要求，但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式。同时，要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。排风的处理方式也需考虑新冠的排风要求。

1、试剂贮存和准备区

面积：20-30平；

压力：+20Pa；

换气次数：10-15次/h

2、进入试剂贮存和准备区的缓冲间

压力：+10Pa。

换气次数：10-15次/h

3、标本制备区主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定 RNA 时 cDNA 的合成。本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外，由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。

3、扩增反应混合物配制和扩增区主要进行的操作为 DNA 或  cDNA 扩增。此外，已制备的 DNA 模板和合成的 cDNA(来自样本制备区)  的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)  制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式  PCR 测定中，通常在第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染危险性，第二次加样必须在本区内进行。本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。

4、扩增产物分析区主要进行的操作为扩增片段的测定。本区是最主要的扩增产物污染来源，因此对本区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。
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