PCR实验是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段。PCR(Polymerase Chain Reaction)即 聚合酶链式反应,又称无细胞分子克隆系统或体外酶促基因扩增法。是分子生物学研究和实验的常规方法,也是生物学、医学临床等领域广泛应用的实验技术。PCR实验又称临床基因扩增实验,通过将病毒体内所含的基因进行扩增,即将微量的DNA大幅增加,以测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。
一、实验室布局形式
(一)分散式
各实验用房彼此相距较远,呈分散布置形式。
各实验之间不易相互干扰。
除各实验室自身做好防护,防止外界环境对实验造成影响外,其它无特殊条件要求。
(二)组合式
完成PCR四个实验过程的实验用房相邻布置,形成集中、独立的实验区域。
每个实验室应设置独立缓冲间、实验室间应设置带消毒装置的传递窗。
二、实验室功能房间主要功能和仪器配置清单
(一)试剂储存和准备区
试剂的制备和贮存,试剂的分装,主反应混合液的制备。仪器有2-8℃和-15℃冰箱、混匀器、微量加样器(覆盖1-1000ul)、移动紫外灯(近工作台面)、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤心)、专用工作服和工作鞋、专用办公用品。
(二)试剂储存和准备区
核酸(RNA、DNA)提取、贮存扩增反应管的制作。仪器有2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱、高速台式冷冻离心机、混匀器、水浴箱或加热模块、微量加样器(覆盖1-1000ul)、可移动紫外灯(近工作台面)、生物安全柜、一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤心)、专用工作服和工作鞋、专用办公用品、如需处理大分子DNA,应具有超声波水浴仪。
(三)扩增反应混合物配置和扩增区
DNA或cDNA扩增。核酸扩增仪、微量加样器(覆盖1-1000ul)、可移动紫外灯(近工作台面)、一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤心)、专用工作服和工作鞋、专用办公用品。
(四)扩增产物分析区
扩增片段的测定。视检验方法不同而定。基本仪器有微量加样器(覆盖1-1000ul)、可移动紫外灯(近工作台面)、一次性手套、一次性吸水纸、加样器吸头(带滤心)、专用工作服、工作鞋、专用办公用品。
三、PCR实验室通风与空调系统设计
(一)标准规范
《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》
《生物安全实验室建筑技术规范》 GB50346-2011
《临床基因扩增(PCR)检验实验室规范》
(二)实验室暖通设计参数
(三)实验室气流流向设计
为避免交叉污染,PCR实验室空气流向必须严格遵循单一方向进行,即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。气流组织采用上送下排,送风口和排风口布置应使室内气流停滞的空间降低到最小程度。在生物安全柜操作面或其他有气溶胶操作地点的上方附近不得设送风口。高效过滤器排风口应设在室内被污染风险最高的区域,单向布置,不得有障碍。
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